SoloVPE可变光程技术验证及实现斜率光谱法在蛋白浓度测定的应用

UV-Vis在蛋白浓度测定的应用

         ——使用可变技术验证及实现法测量

Scott Huffman，Keyur Soni，and Joe Ferraiolo

本摘要翻译于BioProcess International期刊2014年9月版

耗时的、易导致误差的溶液梯度稀释以及固定光程的局限性常常在使用紫外分光光度计测定未知物浓度时困扰着诸多实验员及科学家。由C Technologies研发出的SoloVPE提供的一种革命性的崭新的基于朗伯比尔定律的光谱方法-斜率光谱技术，通过建立吸光度-光程的线性回归方程得出斜率从而得到未知物的浓度完美地解决了这一项历史难题。

在紫外分光光度计的应用中，其原理朗伯比尔定律的数学表达式为A=elc。其中A是吸光度值，e是摩尔消光系数，l是光程以及c是浓度。而斜率光谱技术完美地运用等式的转换得到A/l=ac的数学公式。我们便可以将朗伯比尔定律公式转换成新的线性回归方程，用A=ml+b表达。其中m是回归线性的斜率，b是在Y轴的截距。通过前两个公式的等量转换我们可以得出m=ac.，该等式也通常被称之为斜率光谱方程。若是被测物的摩尔消光系数已知，我们将之带入方程便能得到其浓度。反之亦然。这个方法通过控制光程的可变同时获得吸光度值从而快速地得到准确且重复性高的结果。SoloVPE配置的自动寻找线性范围的运算逻辑，可在仪器线性范围内快速地、准确地得到理想的吸光度值。它将在线性范围内连续地在不同光程下测得5-10个吸光度值，然后通过软件拟合吸光度-光程的线性回归方程并且计算得出回归方程的斜率m，截距b以及线性回归系数R²值。最后通过将斜率值与该被测物的摩尔消光系数代入斜率光谱方程得出被测物的浓度。